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酶標(biāo)儀(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù),用于檢測和定量分析樣品中特定分子(如蛋白質(zhì)、抗體、激素等)的存在和濃度。它的主要用途包括醫(yī)學(xué)診斷、生物學(xué)研究、食品安全監(jiān)測等領(lǐng)域。
酶標(biāo)儀的工作原理基于酶的特異性反應(yīng)和光學(xué)檢測。一般來說,酶標(biāo)儀的操作步驟包括以下幾個關(guān)鍵步驟:
涂覆:將待檢測物(如抗原或抗體)固定在試驗板上,形成一個涂層。
阻斷:加入阻斷試劑,防止非特異性結(jié)合。
反應(yīng):加入待檢測樣品,使樣品中的目標(biāo)分子與涂層上的特異性抗體結(jié)合。
洗滌:通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合物。
探針:加入與目標(biāo)分子結(jié)合的酶標(biāo)記物(如酶標(biāo)記的抗體),形成復(fù)合物。
洗滌:再次洗滌去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物。
底物添加:加入底物,使酶標(biāo)記物催化反應(yīng)生成可測量的信號物質(zhì)(如發(fā)光、顏色變化等)。
讀數(shù):使用酶標(biāo)儀測量信號的強度,根據(jù)標(biāo)準曲線或計算得出待檢測物的濃度。
酶標(biāo)儀的工作原理基于特異性的抗體-抗原相互作用以及酶對底物的催化反應(yīng)。通過測量底物反應(yīng)生成的信號物質(zhì)的光學(xué)性質(zhì),如吸光度、發(fā)光強度或顏色變化,可以間接地推測出樣品中目標(biāo)分子的存在和濃度。
酶標(biāo)儀具有高靈敏度、高特異性和廣泛的應(yīng)用范圍,因此被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、生物學(xué)研究和食品安全監(jiān)測等領(lǐng)域。